电子显微镜 ( EM ) 一直处于超分辨率生物成像的前沿,为表观遗传学、结构基因组学和药物发现等领域的革命性发现铺平了道路。最近,光电关联 ( CLEM ) 技术和低温成像技术正在推动科学前沿的发展,而电子断层扫描和体电子学的新突破则将生物成像的空间分辨率推向了新的水平。
然而,掌握电镜技术并非易事。它是生物学、化学和物理学的交叉学科,有无数复杂的概念等着你去解开。此外,电镜技术应用的多样性令人匪夷所思,而制备每种不同样品的方法也同样多种多样。您遇到的每个样品都是独一无二的,需要个性化处理。
但不用担心,这本电子书将为您提供实用建议,改变您的电镜实验。请继续阅读,了解从您的电镜实验中获得最高质量数据的宝贵见解和实用技巧,特别关注样品制备工作流程。
安德烈亚-平托博士是徕卡显微系统公司的高级工作流程应用专家,常驻海德堡著名的欧洲分子生物学实验室 ( EMBL ) 成像中心。从早期的生物医学科学家到利用深度机器学习诊断原发性睫状肌运动障碍 ( PCD ) 的开创性工作, Andreia 一直致力于探索电子显微镜的奥妙。她最近对呼吸道 SARS-CoV-2 感染的研究表明了她对推动该领域发展的承诺。
安德烈亚拥有十多年的电镜专家经验,我们向她请教了最大的挑战,并将她的建议提炼成这本电子书。前两章包含十个方便的要点,可帮助改进您的工作流程,而第三章则详细介绍了利用序列切片进行阵列断层扫描的电镜样本制备案例研究。
第一章 前期准备
任何建立电镜样品制备工作流程的旅程都必须从笔记本开始,并且必须认识到实现高质量结果所需的复杂规划。在迈出第一步之前,了解和规划路线非常重要 -- 为此,我们首先请 Andreia 就前期准备工作提出建议。
了解您的科学目标
Andreia 主张仔细规划并花时间考虑最终目标,因为这将对样品制备决策产生至关重要的影响:
最需要考虑的始终是最终目标。最终想要实现什么目标?
她还要求大家在制备样本前考虑可能做出的决定,特别是是否需要与光学显微镜进行关联( 例如,用于技术定位或目标研究 )。诸如此类的早期考虑会影响您如何准备样本。
考虑是否只需要保留样本的结构或形态,或者是否需要保留空间背景、抗原性或任何检索荧光的要求。所有这些都需要考虑在内。对于每一种结果,都会有不同的工作流程,涉及不同的设备和不同的技能组合。
将样品准备纳入预算
我们想了解 Andreia 会对打算购买新显微镜的人说些什么。
"令人兴奋! 享受这个过程, 但不要忘记考虑 -- 是否有足够的预算用于适当的样品制备投资? 因为如果没有, 你就必须重新考虑,因为这也同样重要"。
很简单 -- 投资于样品制备,为那些影响样品质量的 "小 " 因素留出足够的资金。现在是做出这些决定的最佳时机,以后再调整冗长复杂的制备方案可能会很困难。
Andreia 还强调,从长远来看,为实验室配备周到的设备将带来更好的数据,他指出,样品制备设备的存在是为了让生活更轻松,并通过减少人为错误和变异性来提高工作的可重复。