可用于低温包埋和聚合过程的自动冷冻替代仪 Leica EM AFS2

出色的可重现性和样品质量： EM GP2-适用于电镜栅格的自动投入冷冻仪 >传感器控制吸液 >自动单侧和多侧吸液 >利用专属液化头，轻松、快速而又安全地填充二次冷冻剂 >可控二次冷冻剂温度 >环境箱温度和湿度可调节 >通过触控面板实现直观控制

Leica EM AFS2采用冷冻替代和梯度变温（PLT）技术，以便实现树脂的低温包埋和聚合。 Leica EM FSP（冷冻替代处理装置）是为Leica EM AFS2特别设计的自动化试剂处理系统，可为冷冻替代和替代变温过程自动稀释和更换试剂。 样品室内部和体视显微镜下都装有LED照明灯，观察和定位样品更加方便。

DM6M LIBS二合一系统 集光学观察与成分分析为一体 无样品制备要求，操作便捷 几秒实现快速成分判定，极大提高检测效率 自带可编辑数据库，进行元素自动识别 可与清洁度分析联用，实现自动异物成分检测 广泛用于锂电池失效分析，锂电池铝壳、正负极电极材料磁性杂质成分分析等等

近期在冷冻电子显微镜工作流程领域取得的技术进步，让我们能够获取到细胞蛋白质社会学的3D数据，其分辨率更是达到前所未有的1纳米以下。工作流程中有一个步骤，需要从样品获取目标位置纳米级分辨率的图像，而要得到这样的结果，就需要用到冷冻光学显微镜。这种显微镜如果用于低温电子显微镜工作流程，通常就称为Cryo CLEM。

冷冻替代是一种在足够低温的条件下进行的脱水过程，以避免形成冰晶，并有效规避在环境温度下脱水后观察到的破坏性影响。在冷冻替代期间，“冷冻”水被有机溶剂溶解，有机溶剂通常也含有化学固定剂[1]。冷冻替代与细胞成分的即刻物理固定（冷冻固定）以及树脂包埋相关联。一旦替代完成，样品会逐渐升温，并与常规制备的样品一样进行进一步处理。与化学固定技术相比，成功的冷冻固定及后续FS处理显示出优良的精细结构保存[2]。即使在非常低的温度下，大分子在有机溶剂中的聚集和生物分子周围水合膜的变化也可能发生，但可以合理地假设，在低于特定阈值的温度下，FS可以保持水合膜[3,4]。

由于电子显微镜中的对比显影主要取决于细胞中有机分子的电子密度差，因此染色效率需取决于附着在生物结构上的染色剂的原子量。所以在电子显微镜中使用最广泛的染色剂是重金属铀和铅。尽管单独使用其中一种染色剂对于常规用途来说较为实用，但依次使用这两种染色剂（醋酸铀UA和柠檬酸铅的“双重染色”）则可以获得最高的对比度。

冲入式低温制样技术是将数微米以内厚度的附着在透射电镜载网上的样品，通过快速冲入液态冷冻剂的方式进行非晶态冰型的低温样品制备。这一制备技术具有操作简单、制备快速的优点，适用于处于溶液状态、悬浮状态、或可附着于透射电镜载网上的各类样品，如分离提纯的生物大分子及大分子复合体溶液，悬浮的细胞器、囊泡、微晶、微生物，附着培养在透射电镜载网上的细胞等生物样品，胶束、纳米颗粒等材料样品。制备后的样品可通过冷冻传输设备传输到透射电镜、光镜、扫描电镜中进行观察。近年来受到广泛关注的低温透射电子显微技术之一——单颗粒三维重构技术所应用的样品大多使用冲入式低温制样技术进行样品制备。本期网络课堂将介绍该制样技术的原理、操作注意要点和实验技巧。

随着生命科学研究的进展，大家对细胞超微结构的研究越来越深入，对电镜图像的要求越来越高。传统的化学固定制样方法会产生细胞结构的收缩，细胞内容物的抽提等结构假象，从而丢失了细胞结构的高分辨信息。

高压冷冻制样可以瞬时将样品冷冻，冷冻替代技术是在低温下缓慢的将样品中的水份替代掉，高压冷冻结合冷冻替代技术保存了样品最原始的超微结构信息和高分辨信息。本期网络课堂将介绍一下高压冷冻及冷冻替代技术的操作要领及实践经验。