会议回顾：2021年徕卡高端显微成像用户会深圳站
2021年11月5日，徕卡高端显微成像用户会在美丽的鹏城——深圳与大家如约而至，这也是我们第一次为一个城市的用户举办成像技术交流会，当天，80余位知名专家、青年学者、研究人员参加了本次会议。由此可见近些年来深圳这座年轻的城市在科研单位建设上的突飞猛进，也能看出当地的科研工作者们拥抱新技术的热情。
会上诸多Leica的资深用户分享了自己的研究成果与心得体会，我们一起来回顾下吧。
讲题一：FLIM技术在生命科学研究中的应用
讲者：南方科技大学 魏闻捷 高级工程师
本次徕卡高端显微成像技术交流会交流环节的开场报告由南方科技大学分析测试中心的魏闻捷老师带来，报告题目为“FLIM技术在生命科学研究中的应用”。本次报告中，魏老师不仅向我们清晰地讲解了什么是荧光寿命，如何在时域和频域上测量荧光寿命，如何利用不可见的荧光寿命进行成像（FLIM），还分析了使用徕卡显微镜进行实验得到的FLIM数据，充分证明了FLIM在可以得到除了光谱信息之外的时间维度上的更多信息。随后魏老师引用了徕卡显微镜的实验数据，介绍了FLIM在生命科学研究中的应用，内容包括FLIM-FRET在代谢组学研究中的优势：可拍摄到光镜下很难拍摄到的过程（如病毒侵染过程）；可进行瞬间/长时间的动态捕捉，定量精确，可重复性好，操作简便；FLIM可利用自发荧光物质作为生物传感器进行微环境的探测；FLIM可进行时间维度的荧光拆分等。除此以外魏老师介绍了常用的FLIM分析软件和APP，并对徕卡的FLIM模块给予了高度评价。魏老师坦言，徕卡的FLIM模块已经完美整合进入徕卡共聚焦软件，作为入门级的操作者，只要会使用徕卡共聚焦显微镜，就可以在进行高质量成像的过程中轻易获取到FLIM数据，对用户非常友好。徕卡显微镜的成像质量配合功能强大的FLIM功能，将会为生物科研工作者提供强有力的支持。
讲题二：白激光在材料科学中的应用
讲者：香港科技大学 何威
何老师在报告中提到，荧光在生活中无处不在，不同发光材料需要的激发光不同，常规可选激光谱线：405、488、514、561、633nm适用于生命科学，但不太能满足发光材料科学的研究，往往无法达到最佳的激发效率，可能错失细胞成像中一些有趣的现象。而徕卡白激光可实现1nm的步距连续调节激发光波长，助力于解决新开发的荧光材料成像问题。
何老师实验室研究的新型荧光染料AIEgens（聚集诱导发光分子）可覆盖整个可见光波段，乃至紫外和红外，这就需要特别适合的激发光来进行生物成像，徕卡最新推出的STELLARIS 8白激光从440到790nm连续可调，可让发光材料的骨架设计更加灵活，并且白激光为脉冲激光，可实现荧光寿命维度成像。另外最新研究的激发光依赖性的簇发光材料，通过波长步长可调的激发光光源照射会发射出不同波长的光，对于新材料在生物成像中的探索和应用起到了推动作用。
讲题三：FLIM在生命科学及材料科学中的应用
讲者：中国科学院深圳先进技术研究院 张鹏飞 副研究员
本次报告中，张鹏飞首先讲解了新型荧光材料的优势（抗漂白能力强、Stokes位移大等），随后向我们介绍了他所带领的研究团队一路走来所开发的荧光材料（包括近红外量子点、AIE染料等）及其应用，还和我们分享了他们团队荧光材料开发的成果及宝贵经验。将FLIM技术和新型近红外量子点“强强联合”后，张老师的团队实现了通过将荧光寿命及强度进行二维结合，进一步实现了提高近红外荧光材料的分辨能力、长时间活细胞成像、活体微环境实时监测等多项技术突破；通过STED技术与AIE材料的“兄弟合力”，张老师成功对活细胞骨架、活细胞的线粒体、溶酶体以及活体的肿瘤组织进行了长时间的成像。张老师在2012年发表的JACS中使用了徕卡SP5共聚焦显微镜，成功对病毒侵染细胞的过程进行了成像，他认为，徕卡的FLIM和STED成像技术可以对荧光材料的开发及应用方面发挥巨大作用，如今随着徕卡STED和FLIM技术水平的不断提升，该类设备会有更多的应用场景。
讲题四：活细胞线粒体STED超分辨成像研究
讲者：深圳大学 杨志刚 副教授
最后一位为大家带来实验分享的是深圳大学物理与光电工程学院的杨志刚老师，他介绍到线粒体内膜结构及动态变化研究可以预测免疫T细胞的免疫记忆能力，并且分裂线粒体的命运预测，为线粒体相关疾病的早期诊断与干预提供有效手段，而要研究这些，就涉及到超分辨成像。杨老师课题组利用荧光探针进行活细胞超分辨成像及结构测量研究，而综合成像分辨率和成像速度，STED超分辨成像具有显著优势。STED成像效果受到荧光探针性能好坏的影响，想要获得更高的分辨率，需要开发具有低损耗激光功率的新型荧光探针，杨老师实验室对此展开了以下三个方面的研究：
1.活细胞线粒体膜邻位二巯基蛋白质共价标记
2.低功率损耗激光（红色、绿色活细胞长时程超分辨成像）
3.低功率单束激发光、单束损耗激光实现双色或多色STED成像
最终开发了一种具有超低饱和损耗激光功率的新型方酸菁染料STED探针，用于活细胞线粒体长时程动态变化超分辨成像及结构测量，为线粒体功能研究提供新的手段，并致力于设计优化新型超分辨探针，进行同步多色STED成像，解决具体生物学问题。
除了各位用户们精彩的科研分享，来自徕卡的各位应用专家们也向客户们介绍了一些前沿技术，重新定义共聚焦的STELLARIS，融合了超分辨和荧光寿命的TauSTED，多光子活体成像新技术DIVE和多功能AI图像分析软件AIVIA。学术交流之后，各位参会者还积极的参加了现场的演示环节，从宽场到共聚焦，从硬件到软件，大家纷纷表示，不断推出的新产品，对于科研的促进作用是显而易见，只是一天时间太短，不能充分的体会和感受。好消息是我们的样机会在深圳停留一段时间，如果有兴趣进一步了解，请联系当地的徕卡工作人员吧，也期待我们来年再会。
