【新品预告】细胞汇合度检测的工作流程：Mateo TL帮您轻松搞定日常细胞培养！
检测细胞汇合度是细胞培养工作流程中的一个常规步骤，常见于生命科学研究和生物制药行业实验室中的各种应用[1,2]。无论研究人员扩增或准备细胞是为了进行下一步的转染、分化、划痕实验、克隆选择、菌落挑选或3D培养类器官，监测细胞的生长都至关重要[3,4] 。
细胞汇合度检测的工作流程步骤：1.细胞接种，2.细胞生长，3.细胞汇合度检测，4.数据处理，5.科学实验[5,6]。
1、细胞接种
在首选细胞培养皿上接种细胞，并将其置于培养箱中。
请注意，细胞接种密度对增殖非常重要。
2、细胞生长
让细胞沉淀下来，附着在培养皿上，并开始生长。可以使用Mateo TL的相差模式来观察细胞形态和生长（图1），并通过辅助对比设置来帮助观察。通过捕获图像来记录细胞培养的状态。
图1：细胞生长快速检测的示例。不同汇合状态的MDCK细胞。使用Mateo TL的相差模式采集细胞培养图像。
3、细胞汇合度检测
在细胞培养中，汇合度是指培养皿中细胞层所覆盖表面积的百分比[2]。
使用Mateo TL汇合度模块，检查细胞培养物的汇合程度。
调节边界检测的灵敏度，应用汇合度测量。
图2：Mateo TL及其细胞汇合度检测的界面（Confluency视频链接）。
Mateo TL的汇合度算法可自动计算图像中细胞覆盖面积的百分比。因为细胞可以在多个区域不均匀地分布生长，建议在低放大倍率下和培养皿的不同区域计算汇合度。
对于报告和细胞培养跟踪，建议保存两张图像：使用相差的当前细胞生长状态图像（图3，上方）和通过汇合度计算所生成的图像（图3，下方）。
图3：HeLa细胞的汇合度检测示例上排所示为相差图像，下排所示为细胞汇合度的判定。Mateo TL算法可测量细胞覆盖面积的百分比。
4、记录和数据处理
在使用图像记录细胞培养状态并测量细胞汇合度之后，有两种模式可以快速便捷地导出图像。
可通过快速共享功能将图像直接无线传输到智能手机或平板电脑上，或者拷贝到USB设备。
如果需要重复采集图像，那么可以使用重复功能轻松再现图库中先前参考图像的成像条件，即光强和相机设置。
5、科学实验
在记录当前培养状态并使用Mateo TL汇合度模块测量细胞汇合度之后，可以开始判断下一步如何进行。常规的细胞培养操作有换液、维持、扩大培养或传代细胞、冻存或停止培养。如果细胞已经达到理想的汇合状态，则可以开始下游的科学实验或进行其常规操作。将一个特定的汇合度作为标准对后续的实验至关重要，例如基因转染、克隆选择、建立细胞系、菌落挑选、重编程和分化。
对于菌落挑选或其他需要同时进行样品处理和显微镜观察的方案，建议清洁Mateo TL显微镜（镜身可以用75%的酒精进行擦拭消毒，显示屏也包括在内）并在层流柜内操作。数字式显示取代了使用目镜，最大限度地减少了眼睛的疲劳，节省下来的空间让显微镜能在层流罩内使用，最大限度降低了污染风险（图4）。
图4：Mateo TL置于层流罩内，以方便进行细胞培养。
Mateo TL数字式透射光倒置显微镜
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让细胞培养的常规检测更容易且一致。
Mateo TL能轻松完成细胞培养检测，并能确保汇合度评价的一致性：
即用型显微镜：从设置到第一幅图像用时不超2分钟。
汇合度模块可辅助常规汇合度检查，从而确定实验节点让工作流程更加标准化。
通过一个共同的测量标准，可以使不同用户和实验之间的汇合度测量保持一致。
让汇合度评价不再需要靠猜，从而最大限度地减少人为误差。
常规细胞培养？轻松搞定！
免责声明：
本文描述了快速检测细胞汇合度的通用工作流程。欢迎使用文中的推荐信息，帮助您改善科学实验。另请注意，文中的信息并不能替代您实验室中采用的细胞培养指南或SOP，也不能替代您的技术专长或知识。如按本文信息进行实验而导致非预期或不良结局，Leica Microsystems概不负责。
参考文献：
1. Segeritz, CP, Vallier, L, Cell Culture: Growing Cells as Model Systems In Vitro, Ch. 9 in Basic Science Methods for Clinical Researchers (2017, Elsevier) pp. 151-172, DOI: 10.1016/B978-0-12-803077-6.00009-6.
2. Geraghty RJ, Capes-Davis A, Davis JM, et al. Guidelines for the use of cell lines in biomedical research, Br. J. Cancer (2014) vol. 111, iss.6, pp. 1021-1046, DOI:10.1038/bjc.2014.166.
3. C.D.Helgason (Ed.), C.L.Miller (Ed.), Basic Cell Culture Protocols (Methods in Molecular Biology) 4th ed. (2013, Springer Nature) DOI: 10.1007/978-1-62703-128-8.
4. G. Vunjak-Novakovic (Ed.), R.I.Freshney (Ed.), Culture of Cells for Tissue Engineering (2006, John Wiley & Sons) DOI: 10.1002/0471741817.
5. T. Straube, C. Müller, How to do a Proper Cell Culture Quick Check: Workflow for subculture of adherent cells, Science Lab (2016) Leica Microsystems.
6. C. Greb, Introduction to Mammalian Cell Culture: Morphology and Cell Types & Organization,
