病毒侵染动态研究莫发愁，FLIM-FRET显身手

齐瑶

2020年， “病毒“这个词反复出现在公众的视野里。当我们在感慨着病毒凶猛、人类渺小和生命无常的同时，对于病毒以及相关的研究技术，我们又了解多少呢？

研究难点

病毒是一种个体微小、结构简单、只含一种核酸（DNA或RNA）、必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。而病毒侵染宿主细胞却是一个非常复杂的过程，主要分为吸附（Attachment）、进入（Entry/Penetration）、复制（Replication）、大分子合成（Biosynthesis）、装配（Assembly）、释放（Release）等几个阶段，如图1。

如何从初始的吸附和进入阶段进行干预阻断，是病毒性疾病防治的切入点之一。以人类免疫缺陷病毒（HIV），也就是引发艾滋病的病原为例，它通过颗粒表面的包膜糖蛋白（Env）与免疫细胞表面的CD4分子、辅助受体互作，实现病毒与宿主细胞的融合、感染过程。科学家们曾运用BlaM（β-内酰胺酶分析：测量细胞群中病毒融合的技术）或细胞内病毒衣壳蛋白p24分析等多种方法对病毒的侵染过程进行检测，但由于技术的限制，均不能直接实时监测病毒进入宿主细胞的动态融合过程^[2]。因此，在时间和空间上都具备高灵敏度的FLIM-FRET，成为了该项研究的破冰技术。

FLIM-FRET

经常关注徕卡课堂的同学们，想必对FLIM-FRET都不陌生了。在这里，我们再简单回顾一下几个关键性的概念。

荧光寿命：荧光是指荧光分子吸收能量后，其处于基态（S₀）的电子跃迁至激发态（S₁