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【案例研究】双视野光片显微镜,适用于类器官及胚胎

一种灵活的光片解决方案,

用于活体样本的高分辨率大体积成像

带有FUCCI指示器的肠道类器官,跟踪细胞周期动态。由Franziska Moos提供。Liberali lab. FMI Basel(瑞士)。

展示复杂多细胞系统的动态是生物学中的一个基本目标。为了应对在大型时空尺度上进行活体成像的挑战,作者在《自然·方法》杂志上发表的一篇论文中介绍了一种开放式多样本双视野光片显微镜。研究发现,Viventis LS2 Live显微镜在以单细胞分辨率成像大型样本方面取得了显著进展。

开放式多样本双视野光片显微镜的优势

该论文重点关注了徕卡显微系统的Viventis LS2 Live显微镜,专为大型多细胞系统的高分辨率活体成像而设计。该显微镜结合了双视野双照明配置,使得科学家能够详细观察类器官的整体动态。论文中的一个例子展示了如何通过双检测在整个样本体中展示单个细胞。通过这种方式,这款显微镜中的光片排列为领域内的研究人员提供了几个关键便利。

作者强调了成功成像各种样本,包括成熟的肠道类器官、囊胚样类器官、水螅人类结肠癌类器官。这些大型样本的大小高达550微米,持续成像时间长达12天,为它们的动态行为提供了宝贵的见解。

由于照明和检测物镜对的独特3D排列,该系统为顶部开放式样品架提供了空间,该样品架具有最多四个样品室。它将光片显微镜的3D成像能力与多位置成像相结合。即使在存在样本间异质性的情况下,也能得出稳定可靠的结论。此外,这些样品室允许在实验过程中通过顶部进行加样

跨时间和跨尺度追踪细胞

作者展示了如何利用显微镜的独特功能。在一个实验中,他们追踪了成熟小鼠肠道类器官的发育,目的是在三天内观察隐窝和绒毛的形成。显微镜的出色分辨率和时间能力为这些大型样本中的单细胞动态提供了详细洞见

小鼠肝脏和人类结肠癌类器官的能像能力展示了显微镜的通用性。作者使用的其他样本类型还包括小鼠腮腺唾液腺类器官和囊胚样类器官。在每种情况下,显微镜都一致地提供高质量图像,同时保持进行准确科学分析所需的自然生长和环境条件

通过使用高阶的追踪、分割和免疫荧光技术,显微镜实现了高质量的单细胞数据采集。论文的作者提供了有关成像样本中不同细胞类型行为和成熟过程的宝贵见解的示例。在整个类器官体积内进行活体成像和免疫荧光的结合在揭示复杂的细胞动态方面发挥了重要作用。

要了解有关开放式、多样本、双视野光片显微镜的更多信息,请阅读《自然·方法》上的开放获取出版物。

进一步了解产品Viventis LS2 Live显微镜,欢迎报名参与7月3日下午14:30的直播,进一步走进光片显微镜的世界。

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2022年10月20日 16:49

对生物样品进行快速可靠的原位成像以揭示复杂的多细胞生物相关的动态过程一直都是光学成像的一大目标。

激光共聚焦显微镜因其优异的光学层切能力广泛应用于追踪复杂的细胞活动。但在大样本及活样品(如斑马鱼、植物等)成像中,我们需要更快速度、更低光毒性、更少漂白的成像技术。2014年《Nature Methods》评选的年度技术——光片技术就很好地满足这一需求,同时还保有优异的空间分辨率。

光片(lightsheet)技术简单来说就是使用一薄层光束从侧面激发荧光样品,随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号,即检测方向与照射方向相垂直。该技术能够以很高的三维分辨率对不同大小的固定样品或活样品进行三维成像,快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。其高速、低毒性、低漂白等优势使得光片技术在生命科学领域开始流行起来,特别是在植物及斑马鱼等模式生物的快速动态观察和发育过程追踪、3D细胞球及类器官的观察、透明化样品的高速高质量成像等研究中受到越来越多的关注。

本视频将着重介绍光片成像技术特点和常见应用。


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光片(lightsheet)技术简单来说就是使用一薄层光束从侧面激发荧光样品,随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号,即检测方向与照射方向相垂直。该技术能够以很高的三维分辨率对不同大小的固定样品或活样品进行三维成像,快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。其高速、低毒性、低漂白等优势使得光片技术在生命科学领域开始流行起来,特别是在植物及斑马鱼等模式生物的快速动态观察和发育过程追踪、3D细胞球及类器官的观察、透明化样品的高速高质量成像等研究中受到越来越多的关注。

本视频将着重介绍光片成像技术特点和常见应用。


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