常温超薄切片光电关联技术的应用

受徕卡显微系统生命科学应用部的邀请，2021年1月28日清华大学蛋白质研究技术中心冷冻电镜平台的博士后，李英博士，在徕卡官方网络直播平台讲解了生物样品光电关联技术的应用。

李英，清华大学蛋白质研究技术中心冷冻电镜平台博士后，负责开发细胞电镜制样相关的实验方法。自2006年以来一直从事电镜制样相关工作，在常温包埋、免疫标记、高压冷冻制样、冷冻超薄切片制样方面有着丰富的经验，自2014年以来服务的用户电镜结果发表在Cell、Nature、Nature cell biology等50余篇杂志上。 

通过荧光染料、免疫荧光标记和遗传标签等蛋白定位成像工具，光学显微镜可以对细胞样品进行多色和实时动态成像，但缺点是由于分辨率的限制，无法显示细胞的超微结构；另一方面，电子显微镜的图像分辨率远超光学显微镜，却只能采集静态细胞无荧光标记信息的黑白图像。光电关联技术（Correlative light and electron microscopy，CLEM）可以将两种技术的优点整合在一起，应用于细胞生物学研究。

李英老师在报告中总结了当前生物样品光电联用技术的几种技术路线，包括冷冻光电关联技术（Cryo-CLEM）和常温超薄切片光电关联技术。其中冷冻光电关联技术可以把样品培养或吸附在载网上，光镜拍摄活细胞图像,出现感兴趣的现象后采用投入冷冻固定样品，再进行冷冻荧光成像，Cryo FIB (可选）和Cryo ET；其中对于生物组织或细胞团样品，也可以用高压冷冻仪进行冷冻固定，之后进行冷冻超薄切片或Cryo FIB；或者引入Tokuyasu免疫标记技术。

而在常温CLEM技术应用中，可以采用高压冷冻和冷冻替代的实验流程制备生物样品，选用合适的荧光标签、包埋树脂、染料和固定液等实验试剂，实现在荧光显微镜和电镜下观察同一样品或同一样品切片的图像。

李英老师在生物样品光电联用方面有着丰富的实践经验，在报告中通过两个实际案例，讲解了培养在光蚀刻共聚焦培养皿上的细胞使用光电联用和连续切片的实验过程和结果，和常温超薄切片通过Mirror CLEM软件实现图像定位和图像合并的应用案例。

在本次技术讲座的最后，李英老师介绍了清华大学蛋白质研究技术中心冷冻电镜平台（http://phoenix.tsinghua.edu.cn/）可以提供的生物电镜制样和成像服务范围，然后回答了直播过程中观众的提问。限于时间关系，部分问题没有来得及做详细解答，观众后期也可以联系李英老师（邮箱liying2017@mail.tsinghua.edu.cn，实验室电话010-62771601），欢迎大家进行生物电镜制样方面的技术交流！

李英老师的本次技术讲座总结了生物样品光电关联技术的几种实验方法，细致的讲解了其中几种实验方法的操作流程，还通过具体的实验案例介绍其中关键的操作细节，拓展了生物超薄切片用户的视野，对从事生物电镜制样工作的老师有非常好的启迪意义，是一次珍贵的、高价值的经典课程！ 

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