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徕卡共聚焦讲堂第14讲：通过3D成像和对亚细胞进行色素鉴定描述罗马地下墓穴光合生物膜的特征
2021年12月23日 17:59
类型技术前沿
徕卡共聚焦讲堂第14讲：通过3D成像和对亚细胞进行色素鉴定描述罗马地下墓穴光合生物膜的特征
人工照明会诱导光合生物膜（黄萎病或maladie verte）的失控生长，从而损坏地下遗迹。为了防止罗马地下遗迹（意大利罗马的St.Callistus和St. Domitilla地下墓穴）发生生物退化或外观损害，人们使用基于荧光光谱法的共聚焦技术来分析单个细胞的荧光色素。该研究可在体内色素识别、生物体形态和生物膜内具有特定荧光特征的细胞的3D定位之间建立同步关系。该技术可比较用绿光(GL)和白光(WL)照射光合生物膜的效果。结果显示在GL的情况下生物膜生长迟缓，表明其可用于文化遗址的照明。
徕卡共聚焦课堂第13讲：声光调制在全光谱型激光共聚焦显微镜系统的应用
2021年12月23日 17:26
类型技术前沿
徕卡共聚焦课堂第13讲：声光调制在全光谱型激光共聚焦显微镜系统的应用
荧光最显著的特征是照射光（激发光）和检测光（发射光）颜色之间的偏移，称为斯托克斯位移。因此，在荧光成像中，不仅要将激发光和发射光的相应波长过滤出来，还需要将激发光从发射光中分离。过去，通常用平面光学元件，包括灰色或彩色滤光片和反射镜进行滤光和分光。虽然有多种平面光学元件可供使用，但固定的规格和低切换效率使其在使用上具有局限性，并且采用不同角度或梯度的涂层作为激发光和发射光的调谐方法也被证实并不可行。现在可以采用全新的技术即使用声光可调谐滤波器()控制激发光，用声光分光器()对激发光、发射光进行分光，可以对激发光和发射光进行自由调谐和高速切换。
徕卡共聚焦课堂第12讲：光谱检测-如何设定特定探针发射光的光谱检测范围
2021年12月23日 16:40
类型技术前沿
徕卡共聚焦课堂第12讲：光谱检测-如何设定特定探针发射光的光谱检测范围
为了拆分多色成像的发射光谱，首先由分束器或色散元件将不同颜色的光引入到不同的方向[1]，带通滤片则能够最大限度地减少串色，并抑制所有残留的激发光，最终到达传感器。在过去，常使用的滤片是普通的玻璃带通滤片。如今，一项革命性的设计诞生了，那就是在多波段组件（探测器）中使用光度计滑块。该设计可以极为有效地探测发射光，同时提供完全可调谐性，与此同时带来的好处是使光谱扫描成为了可能。使用白激光作为光源时，可调谐光谱检测器是唯一与可调谐光源光谱自由度匹配的设备。其他的光谱检测设备使用一系列检测元件，其波段是固定的，但它们不可调谐，灵敏度较低。
徕卡共聚焦课堂第11讲：荧光寿命成像与荧光共振能量转移
2021年12月23日 16:01
类型技术前沿
徕卡共聚焦课堂第11讲：荧光寿命成像与荧光共振能量转移
体内生化定量
荧光寿命是荧光团在发射荧光光子返回基态之前保持其激发态的平均时间长度。这取决于荧光团的分子组成和纳米环境。
FLIM将寿命测量与成像相结合：对每个图像像素以测得的荧光寿命进行颜色编码，产生额外的图像反差。因此，FLIM可以提供关于荧光分子空间分布的信息和有关其生化状态或纳米环境的信息。 FLIM的典型应用是FLIM-FRET。FRET是研究分子相互作用的成熟技术。它能用来研究蛋白质结合并在埃的尺度上估算分子间的距离。
徕卡共聚焦课堂第10讲：无标记荧光寿命成像
2021年12月23日 15:32
类型技术前沿
徕卡共聚焦课堂第10讲：无标记荧光寿命成像
生理学条件下的显微镜成像
很多生物样品都会产生自发荧光。它的光谱往往很宽，会干扰荧光标记。本应用指南论述了自发荧光如何作为荧光寿命成像显微镜(FLIM)中的内在对比度，从而产生多色图像。此外还概述了如何将光谱成像与荧光寿命信息相结合，以区分进而识别生物样品中的不同荧光组分。
活细胞成像简介
2021年12月23日 15:23
类型技术前沿
活细胞成像简介
了解复杂且快速变化的细胞动力学是深入探索生物进程的重要一步。因此，现代生命科学研究越来越需要关注于在分子水平上实时发生的生理事件。
观察和分析活细胞时面临的挑战
在固定细胞或组织中，获取样品“分子状态”的信息已是一项艰巨的任务。如果需要获取实时信息，，就必须尽可能在实验过程中保证细胞自然地运行生理机制，因此将加大实验的困难程度。此外，由于很多生理过程的持续时间仅有几秒甚至几毫秒（例如细胞内离子水平的变化），必须在相对较短的时间内采集大量信息。
徕卡共聚焦课堂第9讲：如何利用自适应反卷积提取图像信息
2021年12月23日 14:45
类型技术前沿
徕卡共聚焦课堂第9讲：如何利用自适应反卷积提取图像信息
共聚焦激光扫描显微镜是真正三维分辨荧光成像的标准。快速光学切片采用灵活的扫描策略，结合同时多色、高灵敏度和低噪声信号检测，在空间和时间域提供了最大的分辨率。结合现代的图像信息提取方法，有助于研究者从获取的图像中挖掘尽可能多的信息。图像信息提取是指利用图像系统的先验知识进行图像增强的智能过程。从简单的眩光控制和光学开发到智能和巧妙的模型提取，有许多方法可以看到图像之外的信息。
徕卡共聚焦课堂第8讲：无限远光学系统
2021年12月23日 11:28
类型技术前沿
徕卡共聚焦课堂第8讲：无限远光学系统
“无限远光学”这一概念是指在显微镜的物镜和镜筒透镜之间具有平行光线的光束路径。平面光学元件可以进入到这个“无限远空间”中，而不影响成像，这对于利用DIC或荧光等对比度方法至关重要。
现代显微技术需要在无限远光路中添加多种光学仪器，如光源或激光装置。满足这一需求的不同方法已经出现，本文对其进行了描述。
徕卡共聚焦课堂第7讲：活细胞成像技术知识点
2021年12月23日 10:59
类型技术前沿
徕卡共聚焦课堂第7讲：活细胞成像技术知识点
可视化生命分子动力学
理解复杂和/或快速的细胞动力学是探索生物过程的重要一步。因此，当今的生命科学研究越来越关注实时动态过程，如细胞迁移，细胞、器官或整个动物的形态变化以及活体标本的实时生理（例如细胞内离子组分的变化）事件。解决这些挑战性需求的一种方式是采用被统称为活细胞成像的光学方法。活细胞成像可研究活细胞的动态过程，而非提供细胞当前状态的“快照”——它把快照变成了电影。活细胞成像可提供单个细胞、细胞网络（原位）甚至整个生物体（体内）中动态事件的空间和时间信息。这些特点让活细胞成像成为解决细胞生物学、癌症研究、发育生物学和神经科学问题的必要技术。
徕卡共聚焦课堂第6讲：光谱成像
2021年12月23日 10:16
类型技术前沿
徕卡共聚焦课堂第6讲：光谱成像
多通道荧光成像的目的是将各种荧光染料发射的光子收集到独立的检测通道中。为此，有必要对全发射光谱的组分进行空间分离，即将这些组分定位到不同的方向。传统上，这种分离是通过“次级二向色镜”（将照明与发射分离的主要分光器，称“主分光器”）进行的。出乎意料的是，还可以通过使用棱镜（首选）或光栅来分离。根据光子的颜色对光子进行物理分类，这是一种原始的真彩分色方法。如果主要分色不充分，则可以通过数学分解来补充。
