发布日期：2022年07月 录制日期：2021年10月 观看量：438

受激辐射损耗显微镜在多种生物样品中的应用

此次会议中李老师针对STED成像优势、成像过程中遇到的问题、解决方法及实际应用展开了详细介绍。

李老师首先就几台超高显微镜的特点，包括分辨率、灵敏度、特殊制样、所见即所得等多方面进行对比。STED纳米显微镜在分辨率方面可突破50nm，并做到所见即所得，但由于STED技术特点，获得高分辨率的同时会受到一些限制，比如需要特殊制样，样品不易太厚，成像深度不够，样品本身需要一定的荧光亮度和信噪比，并且由于较强的STED损耗光无法进行长时间活细胞成像等。随后李老师针对这些问题给出了一些解决或优化方法，在样品制备时，李老师推荐参考徕卡STED样品制备手册，其中会标注注意事项及推荐的染料信息，值得一看。总结几点：优先选择775脉冲激光器；选择受激辐射效果好、信号亮、荧光稳定的染料；选择合适封片剂和标准盖玻片可减少折射率的影响，提高成像深度。在拍摄多通道时，注意拍摄顺序，当不同通道出现位置色差时可用STED标尺校正。超高显微镜的共定位分析不再简单的看两个通道是否重合，而是通过测两个蛋白间的距离来判断相关性。并且结合荧光寿命的新一代TauSTED的出现使得对厚样品不同层、活细胞不同时间的连续成像成为了可能。