如何评估共聚焦光学截面厚度
共聚焦显微镜用于光学切片比较厚的样本。最直接的问题是:1. 什么是“比较厚的样本”;2. 光学切片到底有多厚?这两个问题在一定程度上是相关的,即假设一份厚样本至少比光学切片厚10倍。
生物样本的厚度可以从10米(整只动物)到10纳米(电子显微镜的超薄切片制备)。由于共聚焦显微镜采用了入射光的方法,样本本身的尺寸可能有几厘米或更多,但表面下方的穿透深度取决于材料的不透明度和物镜的工作距离。这就限制了样本大小(z方向),只能考虑使用厚度最多为几毫米的样本。
光学切片的决定因素是衍射极限。根据各种不同的参数,共聚焦扫描显微镜的真正光学截面厚度可达到约0.5毫米。标准共聚焦应用(如组织切片)当中常用的样本厚度为50 µm以内。